Alimentation saine Différences phénotypiques entre les souches commerciales de Lactobacillus rhamnosus GG et L rhamnosus récupérées du sang

Différences phénotypiques entre les souches commerciales de Lactobacillus rhamnosus GG et L rhamnosus récupérées du sang

L’isolement d’isolats cliniques indiscernables, par des méthodes moléculaires, de la souche probiotique de Lactobacillus rhamnosus GG a été rapporté. Nous avons comparé le potentiel de virulence de ces isolats cliniques avec celui de la souche probiotique. propriétés phénotypiques

Les substrats ont été immobilisés passivement dans des puits de plaque de microtitration mg / mL par incubation pendant une nuit à une température de ° C. L’excès de matériau a été lavé avec une solution saline équilibrée HEPES tamponnée mmol / L HEPES; pH, Les bactéries ont été cultivées comme décrit ci-dessus; Pour radiomarquer métaboliquement les bactéries, μL / mL [‘-H] -thymidine Amersham Biosciences a été ajouté au milieu de culture. La densité optique à nm des bactéries radiomarquées a été ajustée à ± avant utilisation dans le test d’adhérence pour standardiser la concentration de bactéries à × cfu / mL Des bactéries ont été ajoutées aux puits et incubées pendant h à ° C. Les bactéries non liées ont été éliminées par lavage avec une solution saline équilibrée de Hanks tamponnée par HEPES. Les bactéries liées ont été relâchées et lysées avec du sodium dodécyl sufate en mol / L NaOH. scintillation liquide, et la valve d’adhésion a été exprimée comme le pourcentage de radioactivité récupérée après l’adhésion par rapport à la radioactivité dans les suspensions bactériennes ajoutées au collagène immobilisé, au fibrinogène ou au mucus. L’hémolyse a été déterminée après Baumgartner et al. dans de l’agar MRS qui a été complété avec% de sang humain de type O et incubé pour h à ° C dans des conditions anaérobies Baci La résistance au sérum a été déterminée par la méthode décrite par Burns et Hull . En bref, du sang a été prélevé sur des donneurs adultes en bonne santé et a été laissé coaguler. le sérum a été chauffé à ° C pendant min pour inactiver le système du complément. Des aliquotes ont été congelées à-° C jusqu’à utilisation. Des bactéries ont été cultivées dans le sérum comme décrit ci-dessus et lavées deux fois avec du PBS mmol / L phosphate; Le pH, et la densité optique à nm ont été ajustés à ± pour normaliser la concentration de bactéries à – cfu / mL. Les bactéries ont été mélangées avec du sérum, du sérum final sérique inactivé par la chaleur, du% ou du PBS et incubées en aérobie La réaction a été arrêtée par incubation sur de la glace pendant min et par dilution en série dans du PBS. Des dilutions ont été étalées dans de l’agar MRS et incubées pendant plusieurs jours à des températures anaérobies. Yersinia enterocolitica / cultivé dans du bouillon Luria Bertani a été inclus comme témoin positif. croître pendant h dans un bouillon MRS et récolté dans HEPES tamponnée solution saline de Hanks et la densité optique à nm a été ajustée à ± PBMC ont été recueillies par lyser les érythrocytes dans du sang humain fraîchement recueilli avec% NHCl PBMC ont été lavés et remis en suspension dans le sel équilibré de Hank solution La concentration de PBMC a été normalisée à x cellules / mL par cytométrie en flux. La mesure de l’explosion respiratoire a été effectuée de la même manière que t décrit par Lilius et Marnila En résumé, μL de solution saline équilibrée de Hanks contenant% de gélatine, μL de -amino -, – dihydro-, – phtalazine-dione luminol; mmol / L, μL de suspension bactérienne et μL de suspension de PBMC ont été ajoutés à des puits de plaque de microtitrage revêtus de gélatine Cliniplate; Labsystems Pour les mesures de fond, les PBMC ont été incubées sans bactéries. Les plaques ont été incubées à une température de ° C et la luminescence a été mesurée pendant h à min avec un compteur Victor multilabel Perkin Elmer Les résultats sont présentés comme le signal maximal mV la soustraction de l’arrière-plan et comme la moyenne des observations au moins indépendantes de PBMC provenant de différents donneurs d’activité API-PLC a été déterminée comme décrit par Rodriguez et al En bref, les μL des souches ont été inoculées par spot sur des milieux solides appropriés. de croissance à ° C, en fonction de la souche, les plaques ont été recouvertes de mL de% agarose-PBS contenant mg ​​/ L Sigma Les plaques ont ensuite été incubées pendant plusieurs jours à ° C, et la formation d’un halo trouble a été déterminée. inclus comme un contrôle positif Tous les résultats sont présentés comme la moyenne d’au moins des observations indépendantes dans l’écart-type Un test t non apparié a été utilisé pour évaluer la sig l’importance P & lt; des différences de valeurs entre la souche probiotique Lactobacillus GG et les isolats cliniquesRésultats Le taux d’adhésion in vitro au mucus intestinal humain, au collagène et au fibrinogène des isolats cliniques testés était différent de celui de la souche Lactobacillus GG originale. Ces mêmes isolats présentaient taux d’adhérence plus élevé que la table de déformation originale; P & lt; Tous les isolats testés présentaient une induction différente de l’éclatement respiratoire que la souche originale. Deux isolats, T et T, induisaient une salve respiratoire plus forte et d’autres souches, T et T, induisaient une plus faible salve. Deux isolats avaient une taux de survie plus faible dans le sérum humain et dans le sérum inactivé par la chaleur que la souche initiale, et l’isolat présentait une résistance plus élevée au sérum inactivé par la chaleur que la souche initiale. Aucun des isolats cliniques testés ne présentait de α- ou β-hémolytique activité ou table d’activité PI-PLC

Tableau View largeTélécharger la lameComparaison des propriétés phénotypiques de Lactobacillus rhamnosus GG et L. rhamnosus GG-like isolats de cas de bactériémieTable View largeTélécharger slideComparaison des propriétés phénotypiques de Lactobacillus rhamnosus GG et L rhamnosus GG-like isolats de cas de bactériémieDiscussion Les lactobacilles sont généralement considérés comme sûrs pour la consommation sur la base de leur longue histoire d’utilisation sûre dans les aliments et de leur présence dans le tractus gastro-intestinal Malgré une forte augmentation de la consommation de produits probiotiques en Finlande, la faible incidence de la bactériémie à Lactobacillus n’a pas été affectée. Dans la présente étude, nous avons étudié les propriétés phénotypiques possiblement liées à la translocation de ces isolats et les avons comparées à celles de la souche initiale. Malgré le fait que les isolats cliniques ne pouvaient pas être distingués de Lac Tobacillus GG sur la base des résultats PFGE, des différences significatives ont été observées dans leurs propriétés d’adhérence in vitro, la résistance à la destruction par le sérum, et l’induction de l’explosion respiratoire En particulier, la résistance à l’immunité innée d’un hôte a été suggérée L’adhésion à la muqueuse intestinale et aux protéines de la matrice extracellulaire est une première étape dans la pathogenèse de nombreux microbes , et des isolats de type Lactobacillus GG adhérant à au moins l’un de ces substrats à des niveaux plus élevés que la souche originale de Lactobacillus GGAll testé isolats cliniques induite par salve respiratoire différemment de Lactobacillus GG Faible induction de l’explosion respiratoire peut contribuer à une survie prolongée après translocation Aussi, la résistance au système du complément contribue à cela Comme la plupart des microbes Gram positif, le isolats ont montré une résistance relativement forte à la destruction par le sérum ngEn raison de la variation observée entre les isolats testés, il est difficile de savoir si les propriétés testées, bien qu’importantes pour les pathogènes, sont pertinentes pour la bactériémie causée par les lactobacilles. Les différences indiquent cependant que les souches ne peuvent pas être différenciées de Lactobacillus GG par les les méthodes moléculaires que nous avons utilisées, elles ne sont pas identiques à Lactobacillus GG sur la base des propriétés phénotypiques

Remerciements

Appui financier Ce travail a été réalisé avec le soutien financier de la Commission des Communautés européennes, en particulier le programme de RDT Gestion de la qualité de vie des ressources vivantes, QLK -CT– Évaluation fonctionnelle des interactions entre le microbiote intestinal humain et l’hôte Cet article ne reflète pas nécessairement le point de vue de la Commission et n’anticipe en aucune manière sa future politique dans ce domaine. MS est employé par Valio, qui détient licence pour Lactobacillus GG ACO et SS: pas de conflits